PCV2感染对猪淋巴细胞NF-κB信号通路及炎性细胞因子表达的动态影响

作者：董林; 王艳萍; 唐娜; 徐倩倩; 苗立中; 王金良; 沈志强^*

来源：中国兽医学报, 2022, 42(06): 1115-1121.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2022.06.03

• PCV2
• 淋巴细胞
• NF-κB
• 信号通路
• 细胞因子

研究PCV2感染猪淋巴细胞对核因子NF-κB信号通路的影响，探索其在NF-κB信号通路中调控炎性细胞因子生成作用机制。选取10头28日龄PCV2抗原、抗体双阴性仔猪，无菌采集、分离脾淋巴细胞，制成单细胞悬液，分PCV2感染组和对照组进行体外培养。感染组PCV2病毒添加剂量250μL/100 mL细胞悬液，对照组加入同体积细胞培养液，培养后0,6,12,24,48 h收集淋巴细胞和上清液。共聚焦电镜检测NF-κB核移位，Western blot检测NF-κB/P65核蛋白、磷酸化抑制性κBα蛋白含量，EMSA检测NF-κB与DNA的结合率，ELISA试剂盒检测上清液中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-10、IL-17和TGF-β1的含量。结果显示，NF-κB/P65蛋白在淋巴细胞核中移位程度随着PCV2感染时间增加而增强，6 h后试验组显著高于对照组(P<0.05)。NF-κB与DNA的结合率与PCV2感染时间呈现线性增长，PCV2感染后6 h试验组显著高于对照组(P<0.05),48 h有所降低，但相对对照组差异不显著(P>0.05)。淋巴细胞质中p-IκBα蛋白表达在PCV2感染后24 h达到峰值，且在整个检测期间相对对照组差异极显著(P<0.01)。PCV2感染组IL-1β和IL-6含量在6,12 h与对照组差异不显著(P>0.05),24 h有所升高，48 h感染组IL-1β和IL-6含量显著高于对照组(P<0.05)。IL-17和TNF-α随着PCV2感染时间延长含量不断增多，6 h显著高于对照组(P<0.05),24 h达到峰值，48 h极显著高于对照组(P<0.01)。IL-10含量呈现明显的先升高后降低的趋势，PCV2感染组6 h开始升高，12 h显著高于对照组(P<0.05),24 h开始降低，48 h与对照组基本一致。TGF-β1含量呈现先降低后升高的趋势，感染组6～12 h含量显著低于对照组(P<0.05),24～48 h明显升高。结果表明，PCV2通过磷酸化降解途径显著激活淋巴细胞中NF-κB信号通路，使其核移位和DNA结合率显著增强，调控炎性细胞因子的表达。通过IL-10和TGF-β1的升高或降低调控机体在感染早期表现免疫抑制，后期出现全身炎症反应的病理特征，并通过TNF-α和IL-17的高表达加重机体全身炎症反应综合征。

• 单位
  山东省滨州畜牧兽医研究院