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摘要
为克隆禽致病性大肠杆菌P型菌毛papA基因，确定其基因分型并分析其变异性，从GenBank数据库中查找大肠杆菌P型菌毛papA基因，并运用Snap Gene 3.2.1软件设计合成3对引物。其中，第1对引物为扩增不同基因分型通用引物，预计扩增片段大小为281 bp;第2对和第3对引物是为了扩增完整papA基因并分析有无变异而设计的，预计扩增片段大小分别为522 bp和943 bp。以禽大肠杆菌HJ2、TK3菌株的基因组为模板进行PCR扩增；将所有扩增片段回收、酶切，并分别与pTG19-T载体进行连接，转化进入DH5α受体菌，提取获得含扩增片段的重组质粒，测序并进行序列分析。结果表明，用引物1从HJ2、TK3菌株的基因组中均扩增获得接近281 bp大小的片段，用引物2则只从HJ2菌株基因组中扩增获得接近522 bp大小的片段，而未能从TK3菌株基因组中扩增出片段；用引物3从TK3菌株基因组中扩增出接近943 bp大小的片段，而未能从HJ2菌株基因组中扩增出产物。经过基因碱基序列分析比对，完整的papA基因则位于943 bp的片段之中，确定HJ2和TK3两个菌株P型菌毛papA基因均属基因11型，但发现二者papA基因存在一定的碱基差异。PapA蛋白氨基酸序列比对发现，同属于基因11型的papA基因编码的PapA蛋白氨基酸序列也存在位点差异。
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单位金陵科技学院
