番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

作者：吴金燕; 言普; 沈文涛; 周鹏

来源：热带生物学报, 2010, 1(01): 50-54.

DOI：10.3969/j.issn.1674-7054.2010.01.011

• 番木瓜
• eIF4E
• eIFiso4E
• 酵母双杂交
• 自激活检测

通过RT-PCR获得番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的编码区,将其分别克隆到pBD-GAL4载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pBD-GAL4-eIF4E,pBD-GAL4-eIFiso4E。测序正确后,将重组质粒导入YRG-2酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。结果表明,获得了正确的番木瓜eIF4E,eIFiso4E基因编码区,并成功克隆到pBD-GAL4诱饵载体中,且转化有诱饵载体的YRG-2在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,在SD/-His-Trp营养缺陷平板上不能生长,说明表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,这为下一步利用酵母双杂交系统检测番木瓜eIF4E,eIFiso4E蛋白与病毒的相互作用奠定了基础。

• 单位
  中国热带农业科学院热带生物技术研究所; 海南大学; 农业部