GⅠ.1型人札如病毒的体外培养及其衣壳蛋白VP1多克隆抗体的制备

作者：杜文静; 刘丹; 丛鑫; 庞立丽; 毛彤瑶; 段招军^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(05): 574-579.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003895

• GⅠ. 1型人札如病毒
• 体外培养
• 衣壳蛋白VP1
• 多克隆抗体

目的 体外培养GⅠ. 1型人札如病毒（human sapovirus,HuSaV），并制备其衣壳蛋白VP1多克隆抗体。方法 将中国疾病预防中心病毒病预防控制所腹泻室保存的GⅠ. 1型HuSaV阳性粪便标本接种至添加不同胆酸盐[甘氨鹅脱氧胆酸（GCDCA）、甘氨胆酸（GCA）]的人十二指肠腺癌细胞（HuTu-80）中，利用PCR和RT-qPCR法确定病毒感染、增殖及传代情况。PCR扩增VP1基因，克隆入原核表达载体pGEX-6P-1，构建重组表达质粒pGEX-6P-1-VP1，转化E. coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组VP1蛋白纯化后免疫2只雌性新西兰大耳白兔，共免疫4次，免疫后18、28、38和48 d采血，ELISA法检测血清效价。结果 GⅠ. 1型HuSaV在胆酸盐GCA存在下可有效感染HuTu-80细胞，增殖后的病毒在HuTu-80细胞中能够稳定连续传3代。表达的重组GST-VP1蛋白相对分子质量约86 000，纯化后约60 000（切除GST标签）。制备的抗HuSaV VP1蛋白多克隆抗体效价可达1∶12 800以上。结论 利用HuTu-80细胞添加胆酸盐成功实现了HuSaV的体外分离培养，并制备了HuSaV VP1蛋白高效价多克隆抗体，为深入开展HuSaV的鉴定、感染及致病机制等奠定了基础。

• 单位
  公共卫生学院; 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所; 甘肃中医药大学