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摘要
目的观察原因不明复发性自然流产(URSA)患者外周血白细胞介素6(IL-6)、微小核糖核酸(miRNA)let-7d-5p水平变化,探讨二者在URSA发病中的关系。方法选取正常早孕妇女(正常妊娠组)和URSA患者(URSA组)各30例,空腹抽取其外周静脉血,ELISA法检测血清IL-6蛋白,q PCR法检测单个核细胞(PBMC)中的let-7d-5p。采用Target Scan生物信息软件,以Target Scan 7. 1程序预测let-7d-5p与IL-6 mRNA的3’非翻译区(3’UTR)是否存在潜在结合位点;将293T细胞分为干预组和对照组,分别同时转染let-7d-5p(空白对照NC)与野生型或突变型IL-6 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因pmir GLO载体,采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光素酶报告基因活性。将293T细胞分为3组,过表达组、抑表达组利用Lipofectamine 2000转染let-7d-5p mimics及inhibitor,空白对照组转染阴性对照引物;转染24 h后收集细胞,q PCR检测各组细胞中的IL-6 mRNA,ELISA检测各组培养上清液中的IL-6。结果与正常妊娠组比较,URSA组外周血IL-6蛋白水平升高,而PBMC中let-7d-5p表达降低(P均<0. 05)。Target Scan 7. 1程序预测显示,let-7d-5p与IL-6 mRNA的3’UTR之间具有潜在的碱基互补结合位点;双荧光素酶报告基因系统检测显示,与对照组比较,干预组能降低野生型IL-6 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因活性(P <0. 05),但对突变型IL-6 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因活性无明显影响(P> 0. 05)。与空白对照组比较,过表达组细胞中IL-6 mRNA表达及细胞上清液中IL-6水平降低(P均<0. 05),抑表达组细胞中IL-6 mRNA表达及细胞上清液中IL-6水平升高(P均<0. 05)。结论 URSA患者血清IL-6蛋白水平升高,而PBMC中let-7d-5p表达降低; let-7d-5p与IL-6 mRNA 3’UTR结合并抑制IL-6表达,靶向let-7d-5p调控IL-6表达可能成为URSA治疗的有效途径。
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