稳定表达CDC50A的卵巢癌细胞株的建立及鉴定

作者：韩甜甜; 尹婕; 曾靖; 金滢; 李艳; 潘凌亚

来源：基础医学与临床, 2022, 42(6): 896-901.

DOI：10.3969/j.issn.1001-6325.2022.06.007

• CDC50A
• 过表达
• 卵巢癌
• 稳定表达

目的 以分子克隆技术建立稳定表达人细胞周期调控蛋白50A(CDC50A)的SKOV3细胞株.方法 通过分子克隆技术将CDC50A定向连接到表达载体pLVX-IRES-GFP上.pLVX-CDC50A-GFP表达质粒经慢病毒包装,稳定转染SKOV3,建立稳定表达CDC50A的SKOV3细胞株,通过流式细胞测量术、免疫印迹、免疫荧光分析其Flag标签蛋白表达.结果 通过电泳及酶切鉴定证实了pLVX-CDC50A-GFP表达载体的构建,荧光显微镜定性观察病毒感染效率,流式细胞测量术检测感染效率为86.5％,免疫印迹法只检测到pLVX-CDC50A-GFP表达质粒的SKOV3细胞株有Flag标签蛋白表达,阴性对照组无蛋白表达.结论 成功构建了CDC50A的表达载体,并通过慢病毒感染建立了过表达CDC50A的SKOV3细胞株,为开展CDC50A在卵巢癌中的机制研究奠定了基础.

• 单位
  北京协和医院; 中国医学科学院; 北京协和医学院