携带小鼠Shh基因慢病毒表达载体的构建实验

作者：陈美玲; 宋珂; 石琦; 曹颖光

来源：临床口腔医学杂志, 2017, 33(10): 592-596.

• 慢病毒载体
• Sonic Hedgehog
• 基因传递
• 骨组织工程

目的:构建Sonic Hedgehog(Shh)基因慢病毒载体,并进行鉴定。方法:构建携带Shh基因慢病毒表达质粒载体p LV.Ex2d.P/puro-EF1A-m Shh,RT-PCR反应和基因测序证实质粒载体构建成功。对载体进行包装,测定病毒滴度。将携带Shh基因慢病毒颗粒以感染复数(MOI=10)转导HT1080细胞,使用RT-PCR法检测转导细胞中Shh基因的表达。结果:成功构建携带Shh基因的慢病毒表达载体(Lenti-Shh),病毒滴度为2.9×107TU/m L。RTPCR检测结果证明Lenti-Shh转导细胞成功表达Shh基因。结论:成功构建小鼠Shh慢病毒载体系统,为基因增强型骨组织工程提供可靠的基因传递载体。

• 单位
  华中科技大学同济医学院附属同济医院