鸡PERP1基因功能分析、核心启动子筛选及其转录因子预测

作者：陈林; 王家乡^*; 吴艳^*; 皮劲松; 张颖; 李成凤

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(09): 3449-3458.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.09.001

• 鸡
• PERP1基因
• 核心启动子
• 颗粒细胞
• 转录因子

【目的】研究TP53凋亡效应因子(PERP1)在卵泡发育中的调控作用及表达机制。【方法】以蛋鸡卵巢组织为材料，克隆蛋鸡PERP1基因CDS区全长序列，并构建PERP1基因过表达载体，通过转染鸡卵泡颗粒细胞，采用实时荧光定量PCR检测转染后PERP1基因，增殖凋亡相关基因BCL2、c-Myc,以及氧化应激相关基因SOD2、CAT的相对表达量。利用3个在线生物信息学分析软件分别预测鸡PERP1基因核心启动子区，并根据预测结果设计6个启动子缺失片段引物，以蛋鸡血液组织为材料，克隆PERP1基因5′-UTR的6个启动子缺失片段并构建重组质粒，并以荧光素酶报告基因试验验证启动子活性区域位置。采用4个转录因子在线预测软件进行启动子活性区转录因子的预测分析。【结果】本研究成功获得鸡PERP1基因的CDS区全长序列并成功构建了PERP1基因的过表达载体。PERP1基因过表达后，与对照组相比，抗凋亡基因BCL2和促增殖基因c-Myc表达量极显著下调(P<0.01),抗氧化应激基因CAT和SOD2的相对表达量无显著差异(P>0.05)。生物信息学软件预测和荧光素酶报告载体试验结果表明，PERP1基因核心启动子位于CDS区上游(―441/―71 bp)的位置。转录因子预测结果发现Sp1、ZEB1、Zic3、c-Jun、AP-2alpha、AP-1、NF-1、c/EBPalp、Adf-1、HNF-3、CACCC-bi、c-Myc和Smad4共13个候选转录因子。【结论】PERP1基因具有促进颗粒细胞凋亡的功能，调控该基因的表达对卵泡发育具有重要意义。

• 单位
  湖北神丹健康食品有限公司; 长江大学; 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所; 动物科学学院