非洲猪瘟病毒RAA-CRISPR/LbCas12a检测方法的建立与初步应用

作者：李朝阳; 胡文阳; 党梦; 魏战勇; 朱河水; 陈宇^*

来源：中国兽医科学, 2022, 52(12): 1475-1481.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0206

• 非洲猪瘟病毒
• CRISPR/LbCas12a
• 重组酶介导等温扩增

本研究基于重组酶介导的扩增技术(recombinase-aid amplification,RAA)，联合CRISPR/LbCas12a检测方法，筛选crRNA引物，对不同浓度阳性质粒、其他猪病病毒核酸样品、病料样品进行RAA扩增，随后进行荧光检测，探索检测ASFV的新方法。结果显示，RAA-CRISPR/LbCas12a检测方法的灵敏度达1×103copies/μL，不与其他病毒核酸样品产生交叉反应。利用RAA-CRISPR/LbCas12a方法对22份灭活的猪组织病料进行临床ASFV检测，同时进行qPCR平行检测。结果显示，两种方法的检测结果相同，同时检出18份阳性。综上所述，本研究建立的ASFV RAA-CRISPR/LbCas12a检测方法具有较好的敏感性和特异性，能够在1 h内对ASFV核酸进行判定，且较为方便，在临床ASFV检测中有着一定的应用前景，对于预防非洲猪瘟有一定的推动作用。

• 单位
  长江大学; 动物科技学院; 河南农业大学