B7-1转基因骨肉瘤疫苗的制备及鉴定

作者：宁旭; 刘勇; 杨述华; 傅德皓; 梅荣成

来源：山东医药, 2005, (26): 10-12.

DOI：10.3969/j.issn.1002-266X.2005.26.004

• B7基因
• 绿色荧光蛋白
• 肿瘤疫苗
• 骨肉瘤

目的构建含B 7-1基因与绿色荧光蛋白(GFP)基因的融合表达载体,转染LM 8骨肉瘤细胞制备骨肉瘤疫苗。方法用RT-PCR法扩增B 7-1基因片断,应用含GFP基因的真核表达质粒构建融合表达载体,酶切、测序鉴定构建质粒;采用脂质体介导方法将其转染到LM 8细胞,并用荧光显微镜及LCM结合蛋白免疫印记检测其在肿瘤疫苗细胞中的表达。结果经PCR及酶切鉴定,证实成功构建了含B 7-1基因的真核表达重组体pEGFP-C 1/B 7,重组子测序结果与国际基因文库中m B 7-1序列相符。用荧光显微镜观察到疫苗细胞中有GFP表达,RT-PCR检测到疫苗细胞中B 7-1基因的表达,w esternb lot发现疫苗细胞中有B 7蛋白的表达。结论B 7-1重组真核绿色荧光表达载体pEGFP-C 1/B 7已成功构建,转染LM 8细胞成功制备了骨肉瘤细胞疫苗。

• 单位
  贵阳医学院附属医院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院