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摘要
【目的】探讨伪狂犬病毒(PRV)感染对BHK-21悬浮细胞内质网应激及未折叠蛋白反应(UPR)的影响。【方法】将悬浮的乳仓鼠肾细胞(BHK-21)以感染复数(MOI) 0.01接种PRV,分别在接毒后12、24、36、48和56 h取样，用CCK-8法检测细胞存活率，按Reed-Muench法检测病毒滴度，筛选病毒接种处理的合适时间；以不接毒细胞作对照组，分别在感染后12、24、36和48 h取样，用实时荧光定量PCR法检测内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及UPR的3种感受蛋白(PERK、IRE1、ATF6)相关通路中基因的表达变化，Western blotting法检测相关蛋白的表达变化。在接种PRV同时分别加入0、0.001、0.005、0.01和0.02μmol/L内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(Tg)和0、20、40、80和160μmol/L内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(TUDCA),48 h收集细胞测定病毒滴度和细胞存活率。【结果】PRV感染56 h细胞存活率低于70%,感染48 h时病毒滴度达到最高(8.1 lg TCID50/mL),因此后续试验分别在接毒后12、24、36和48 h取样。与对照组相比，PRV感染36和48 h GRP78转录水平均极显著升高(P<0.01);PERK通路中，转录激活因子4(ATF4)转录水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P<0.01),生长抑制DNA损伤基因34(GADD34)转录水平在PRV感染36 h显著升高(P<0.05)、48 h极显著升高(P<0.01),磷酸化真核翻译起始因子(P-eIF2α)蛋白水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P<0.01);IRE1通路中，PRV感染组细胞36 h后多以剪切形式sXBP1存在，同时下游p58IPKmRNA水平在36 h显著增加(P<0.05),p58IPK和EDEM mRNA水平在48 h均极显著增加(P<0.01);ATF6通路中，PRV感染不同时间ERp57、PDI、Calnexin和Calreticulin的表达均无显著变化(P>0.05)。与0μmol/L组相比，0.01和0.02μmol/L Tg极显著降低细胞存活率(P<0.01),0.005和0.01μmol/L Tg均极显著增加了PRV病毒滴度(P<0.01)。【结论】PRV感染可以诱导BHK-21悬浮细胞内质网应激，激活UPR的PERK和IRE1信号通路，说明PRV利用内质网应激增强其复制。
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