人内皮抑素重组腺病毒的构建及其在人视网膜色素上皮细胞的表达

作者：张美霞; 张军军; 严密; 闫乃红

来源：眼科新进展, 2008, (04): 245-248.

• 血管生成抑制剂
• 内皮抑素
• 视网膜色素上皮细胞
• 腺病毒
• 免疫印记

目的观察构建的含人内皮抑素(human endostatn,hES)基因腺病毒载体对人视网膜色素上皮(human retinal pigment epitheliaum,hRPE)细胞的感染及其基因表达情况,为眼内新生血管性疾病治疗提供一定的实验依据。方法原代培养hRPE细胞,行角蛋白免疫组织化学进行鉴定。从真核表达载体pEGFP-N1-ASP-hES将ASP-hES扩增,亚克隆至pAdTrack CMV穿梭质粒中,与pAdEasy1质粒在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组为腺病毒载体,线性化后转染293细胞进行包装扩增。用该腺病毒感染hRPE细胞,应用荧光显微镜和Western blot检测病毒感染及外源基因的表达情况。结果角蛋白免疫组织化学显示所培养的细胞为hRPE细胞,感染24h后荧光显微镜下可见RPE细胞中有大量的绿色荧光蛋白表达,Western blot结果显示hES蛋白高表达。结论构建的hES腺病毒对hRPE具有极高的感染效率,可作为一种良好的基因导入载体,为ES基因治疗眼内新生血管性疾病的进一步研究奠定了基础。

• 单位
  四川大学华西医院