分泌型糖蛋白Reelin对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的视网膜神经节细胞凋亡的抑制作用

作者：王艳婷; 金学民; 李晓华; 赵朝霞

来源：眼科新进展, 2021, 41(06): 518-521.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2021.0108

• Reelin
• 青光眼
• 视网膜神经节细胞
• Tau蛋白
• 细胞凋亡

目的探讨分泌型糖蛋白Reelin对N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)诱导的视网膜神经节细胞(RGC)凋亡的抑制作用。方法将大鼠RGC-5分为对照组、NMDA组、Reelin类似物组、Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组。对照组细胞用含双抗的氨基酸双抗培养基培养,NMDA组在对照组细胞培养基中添加100μmol·L-1 NMDA后进行细胞培养,Reelin类似物组、Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组在NMDA组细胞培养基的基础上利用Lipofectamine 2000将Reelin类似物、阴性对照和抑制物转染RGC-5,共同孵育24 h。用Annexin V FITC/碘化丙啶联合流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内Reelin、磷酸化-Tau蛋白(p-Tau)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和细胞周期素依赖蛋白激酶5(CDK5)表达情况。结果对照组RGC-5细胞凋亡率为(9.30±0.74)%,NMDA组为(25.40±1.13)%,NMDA组高于对照组,差异有统计学意义(t=6.311,P<0.001)。NMDA组RGC-5内Reelin蛋白表达水平低于对照组,p-Tau、GSK-3β和CDK5蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。Reelin类似物组细胞凋亡率为(9.23±0.24)%,低于Reelin阴性对照组[(14.33±1.02)%]和Reelin抑制物组[(26.81±1.15)%],各组细胞凋亡率差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Reelin类似物组RGC-5内p-Tau、GSK-3β蛋白表达水平均低于Reelin阴性对照组和Reelin抑制物组,Reelin抑制物组RGC-5内p-Tau、GSK-3β蛋白表达水平均高于Reelin阴性对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);CDK5蛋白表达水平在3组中基本一致,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Reelin对NMDA诱导损伤的RGC具有保护作用,这种作用是通过下调GSK-3β表达抑制Tau蛋白磷酸化,进一步抑制细胞凋亡而实现的。

• 单位
  郑州大学第一附属医院; 河南省人民医院