CYP2C19基因多态性PCR扩增体系的正交优化与验证

作者：王梅; 赵晨迪; 胡忠良; 廖忠意; 黄江; 吴敬杰^*

来源：基因组学与应用生物学, 2019, 38(05): 1990-1996.

DOI：10.13417/j.gab.038.001990

• 正交设计
• CYP2C19
• PCR体系
• 体系优化
• 基因多态性
• SNaPshot

本实验通过建立CYP2C19*2、*3和*17基因多态性PCR反应体系和条件,筛选出4μL体系中各因素最佳水平。采用SNaPshot技术对CYP2C19基因3个SNP位点*2、*3和*17同时进行复合扩增检测,利用L9(34)正交实验设计,对影响PCR反应体系和条件的3个因素(PCR Mix, Taq DNA聚合酶,循环次数)在3个水平上进行优化,结果采用综合评分法和极差分析法进行分析。用3组已知样本对正交优化所得条件进行重复性和稳定性验证。结果表明CYP2C19*2、*3和*17基因PCR扩增体系的影响因素依次为:PCR Mix>循环数>Taq DNA聚合酶。最佳反应体系为PCR Mix 2.0μL、Taq DNA聚合酶0.2μL、循环次数32次。3组样本验证效果满意。优化的CYP2C19*2、*3和*17基因PCR反应体系稳定性高,重复性和经济性较好,为该基因多态性的大规模调查奠定了基础。

• 单位
  贵州警察学院; 贵州医科大学