推定铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位的DNA结合能力检测

作者：申晓冬; 张克斌; 李明; 胡晓梅; 周莹冰; 陈志瑾; 胡福泉

来源：第三军医大学学报, 2009, (05): 379-382.

• 末端酶小亚单位
• 噬菌体PaP3
• EMSA
• 蛋白表达 terminase small subunit
• bacteriophage PaP3
• electrophoretic mobility shift assay
• protein expression and purification

目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109后,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后发现目的蛋白质H6-PaP3P01存在于上清中,进而利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白。利用PCR与酶切方法获取可能含有末端酶小亚单位结合位点的DNA片段,并对其3′端进行生物素标记。最后采用凝胶迁移率改变实验检测H6-PaP3P01的DNA结合能力。结果成功构建了pQE-PaP3P01表达载体,获得的融合蛋白H6-PaP3P01表达...

• 单位
  中国人民解放军陆军军医大学; 新桥医院