产琥珀酸大肠杆菌工程菌株的构建

作者：岳方方; 姜岷; 马江锋; 于丽; 刘树文; 韦萍

来源：中国酿造, 2010, (02): 25-29.

• 大肠杆菌
• 琥珀酸
• 丙酮酸羧化酶
• RED重组
• 无痕敲除 Escherichia coli
• succinate
• pyruvate carboxylase
• RED recombination system
• knockout with no mark

大肠杆菌在厌氧条件及不额外添加电子受体的条件下可利用葡萄糖进行混合酸发酵,主要产物为甲酸、乙酸和乙醇,丁二酸及乳酸含量较低。为减少副产物的生成,使更多的代谢流流向丁二酸,本研究拟失活厌氧条件下甲酸、乙酸及乳酸主要生成途径相关的酶(乳酸脱氢酶和丙酮酸甲酸裂解酶)。借助Red重组系统和位点特异性重组技术,无痕敲除了野生大肠杆菌W3110染色体上编码2个酶的基因pfl和ldh,构建了1株pfl和ldh双突变重组菌JM130(7△pfl△ldh),并引入PYC前后对比实验表明:JM1307(pTrc99a-pyc)较出发菌株解除了生长抑制,在8g/L初糖条件下,发酵48h,菌体密度可提高至OD6002...

• 单位
  材料化学工程国家重点实验室; 南京工业大学