IL-17真核表达载体的构建及其在胶质瘤细胞株U87MG中的表达与筛选

作者：胡锦辉; 邱潮林; 华玲; 谢秋华; 何小雪; 沈振华; 胡珺

来源：现代免疫学, 2013, (02): 107-112.

• IL-17
• U87MG
• 胶质瘤
• pEGFP-N1

IL-17可以通过多种途径促进肿瘤发展,前期工作发现胶质瘤组织中IL-17高表达,本研究拟构建IL-17真核表达载体pEGFP-N1-IL-17,并且稳定转染胶质瘤细胞株U87MG,为研究IL-17在胶质瘤中作用提供基础。取血小板减少性紫癜自愿患者外周血2ml,Ficoll分离PBMC,提取RNA后经含BamHⅠ及SalⅠ酶切位点引物逆转录成cDNA,连接T载体,酶切后与经相同酶切的载体pEGFP-N1连接,卡那霉素筛选,重组载体经Xfect试剂转染胶质瘤细胞U87MG,以G418筛选,单克隆阳性株扩大培养,经荧光、Real Time PCR及ELISA鉴定。构建真核表达载体pEGFP-N1-IL-17测序正确。经荧光、Real Time PCR、ELISA检测稳定转染细胞株pEGFP-N1-IL-17-U87MG成功,IL-17转染后U87MG细胞MCP-1分子表达下调。因此,本研究成功构建IL-17真核表达载体pEGFP-N1-IL-17,并稳定转染U87MG,为研究IL-17在胶质瘤中作用提供了基础。