流式细胞仪分选小鼠Kupffer细胞方法的建立与评价

作者：户乃丽; 徐晓雪; 邹林樾; 田蜜; 赵君朋

来源：分析仪器, 2021, (06): 130-134.

• 流式细胞
• 分选
• Kupffer
• 细胞

目的:建立流式细胞仪分选小鼠肝脏Kupffer细胞(KCs)的方法。方法:小鼠肝脏经胶原酶灌注后密度梯度离心法分离非实质细胞,流式细胞分选仪分选单细胞悬液中7-AAD-CD45+CD11b+F4/80+肝脏KCs并检测分选后细胞纯度,台盼蓝染色检测细胞活力,荧光微球吞噬实验检测细胞吞噬功能,CD86、CD206染色鉴定KCs细胞分型,脂多糖(LPS)刺激后检测炎性因子TNF-α、IL-1β的表达情况。结果:经过密度梯度分离和流式细胞分选,获得的7-AAD-CD45+CD11b+F4/80+细胞纯度为(96.1±1.8)%,细胞存活率(96.5±2.1)%,分选后CD86+和CD206+所占比例分别为(92.3±1.6)%、(2.1±0.8)%,吞噬荧光微球的细胞百分比为(84.7±3.6)%,LPS刺激8h后,培养上清液中TNF-α、IL-1β显著升高(P<0.001)。结论:流式细胞分选仪可快速高效分离小鼠肝脏KCs,分选后的KCs保持良好细胞活性和吞噬功能,LPS刺激可诱导其分泌大量炎性因子。

• 单位
  中心实验室; 首都医科大学