Vero E6细胞中B23.1基因的扩增及其原核表达

作者：吕茂杰; 陈建飞; 时洪艳; 冯力

来源：中国畜牧兽医, 2012, (03): 33-36.

• VeroE6细胞
• B23.1基因
• 重组蛋白
• 反应活性 Vero E6 cell
• B23.1 gene
• recombinant protein
• reactivity

应用RT-PCR技术,利用含有酶切位点的上、下游引物扩增得到Vero E6细胞中编码B23.1蛋白的基因片段,并进行序列测定及分析,结果表明,B23.1基因含有一个长901bp的开放阅读框(ORF),未发现碱基的插入和缺失。将其进行BamHⅠ和XhoⅠ双酶切,而后定向克隆到经相同双酶切的pGEX-6p-1载体中,构建的重组质粒命名为pGEX-6p-B23.1;将该质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,在IPTG诱导下进行表达;SDS-PAGE结果表明,表达出与预期大小相符的约68ku的重组蛋白,重组蛋白主要以包涵体形式存在;Western blotting分析结果表明,表达的重组蛋白与B23...

• 单位
  兽医生物技术国家重点实验室; 华北电力大学（保定）; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所