当归种子蛋白质提取方法及SDS-PAGE技术体系研究

作者：张延红; 高素芳; 王燕; 李金田; 杜弢

来源：中国药房, 2017, 28(13): 1751-1754.

• 当归
• 种子
• 蛋白质提取
• SDS-PAGE

目的:建立适用于当归种子蛋白质提取及十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的技术体系,为当归种子蛋白质研究和品种纯度检测提供技术支撑。方法:以蛋白质含量和电泳条带数量等为指标,采用浓缩胶法、盐溶蛋白法、电极缓冲液法、二巯基苏糖醇(DTT)法、尿素法、巯基乙醇法、三羟甲基氨基甲烷(Tris)法、丙酮沉淀法等8种方法提取当归种子蛋白质,筛选最优提取方法;再以最优提取方法为基础,考察不同料液比、样品稀释倍数(上样量)和分离胶浓度对当归种子蛋白质提取及SDSPAGE效果的影响。结果:8种提取方法中以巯基乙醇法提取蛋白质的含量较高(29.931 mg/g),且电泳条带数目多、泳道背景清晰;当以巯基乙醇法为最优提取方法时,料液比为1∶10、上样量为5倍、分离胶浓度为15%条件下电泳效果最好,共得到18条条带。结论:建立的蛋白质提取方法和SDS-PAGE技术体系适用于当归种子纯度的检测。

• 单位
  甘肃中医药大学