RNA干扰p38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用

作者：陈俊明; 吴登爽; 王志向; 吴震杰; 刘冰; 鲍一; 叶华茂; 杨庆; 曲乐; 王林辉

来源：第二军医大学学报, 2016, 37(07): 799-804.

DOI：10.16781/j.0258-879x.2016.07.0799

• 肾肿瘤
• 肾细胞癌
• p38
• 靶向治疗
• 增敏
• siRNA干扰

目的探讨RNA干扰p38基因对人肾癌细胞株786-O增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响。方法构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组。应用RT-PCR技术检测786-O细胞p38mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达。CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果 RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-O细胞p38mRNA及蛋白的表达均降低。与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后35d时的增殖率均降低(P<0.05,P<0.01),细胞对舒尼替尼的敏感性增加,两组对舒尼替尼的IC50值均低于阴性对照组[(3.2±0.3)、(1.4±0.1)μmol/mL vs(5.4±0.2)μmol/mL,P<0.05]。siRNA531组、siRNA659组G1期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G0/G1阻滞。转染24h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组(76.27±5.08)相比,两组细胞的侵袭能力均下降(P<0.01)。结论通过转染p38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的p38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础。

• 单位
  南京大学; 长征医院; 长海医院; 南京军区南京总医院; 中国人民解放军第二军医大学; 武警河南总队医院