甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法的建立

作者：汪涵; 吴伟怀; 杨旭光; 杨先锋; 李锐; 郑金龙; 黄兴; 梁艳琼; 贺春萍; 易克贤

来源：热带作物学报, 2017, 38(12): 2334-2339.

DOI：10.3969/j.issn.1000-2561.2017.12.021

• 甘蔗褐锈病
• 黑顶柄锈菌
• 巢式PCR分子检测

为建立甘蔗褐锈病菌巢式PCR分子检测方法,本研究利用真菌DNA内源转录间隔区通用引物ITS1/ITS4扩增甘蔗黑顶柄锈菌DNA,并对其扩增产物进行克隆测序,获得序列于NCBI网站进行比对分析,并于该序列多态性丰富区域设计了2对引物PM2F/R、PM3F/R。通过对同寄主不同病原菌、以及不同属的锈菌DNA进行PCR检测以验证引物的特异性。结果表明,在优化的单一PCR反应体系与程序条件下,2对引物均仅能从甘蔗黑顶柄锈菌中扩增出约474 bp和363 bp的特异条带,而从其它真菌DNA中均扩增不出任何条带。进一步将引物PM2F/R作为第一轮扩增引物、PM3F/R作为第二轮扩增引物进行巢式PCR扩增后,其检测灵敏度在DNA水平上可达0.001 ng/μL,较常规PCR提高100倍。由此表明,依据本研究所设计的2对引物而建立的快速、灵敏、准确的甘蔗黑顶柄锈菌的检测技术,对病原菌的早期诊断、快速检测及病害流行学研究具有重要意义。

• 单位
  中国热带农业科学院环境与植物保护研究所; 农业部; 海南大学; 宁夏出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心