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摘要
目的观察感觉神经肽P物质与表皮干细胞(ESC)联合应用对糖尿病大鼠创面愈合与神经再生的作用。方法分离培养SD大鼠ESC(经鉴定),接种于羊膜滋养层上构建羊膜-ESC备用。选择48只糖尿病模型大鼠,每只背部制作4个全层皮肤缺损创面。按随机抽签法将此192个创面分为ESC+P物质组、ESC组、P物质组、对照组,每组48个创面。ESC+P物质组和ESC组创面均移植羊膜-ESC,P物质组、对照组创面移植羊膜。移植后,ESC+P物质组、P物质组在创周及创面中央注射1×10~(-7)mol/L的P物质250μL,ESC组、对照组在创周及创面中央注射PBS 250μL作对照,各组每日注射2次,连用4 d。于大鼠伤后4、7、10、14、17、23 d,观察并计算创面愈合率(每时相点8个创面),HE染色观察创面组织结构改变。伤后4、7、10 d,行Masson染色观察创面组织总胶原分布,免疫组织化学染色观察Ⅰ、Ⅲ型胶原沉积量。伤后14、23 d,用免疫组织化学染色法观察创面组织中蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)及P物质阳性神经纤维分布情况。对数据行单因素方差分析和t检验。结果 (1)ESC+P物质组伤后14 d创面愈合率达100.0%,明显早于ESC组、P物质组、对照组完全愈合时间(伤后17、17、23 d)。HE染色显示ESC+P物质组创面愈合质量明显优于其余3组。(2)伤后10 d,ESC+P物质组与P物质组创面组织中胶原着色深、面积广;其余2组胶原染色较浅、面积较小。随着伤后时间推移,各组创面Ⅰ型胶原沉积量逐渐升高,Ⅲ型胶原沉积量逐渐下降。伤后4、7、10 d,ESC+P物质组Ⅰ型胶原沉积量明显高于ESC组(t值分别为32.72、118.21、26.71,P值均小于0.01)和对照组(t值分别为44.37、22.76、30.32,P值均小于0.01);ESC+P物质组与P物质组水平相对接近。伤后4、7、10 d,ESC+P物质组创面Ⅲ型胶原沉积量明显高于ESC组(t值分别为32.27、28.68、14.51,P值均小于0.01)和对照组(t值分别为35.68、22.52、22.24,P值均小于0.01)。(3)ESC+P物质组与P物质组创面组织中有大量PGP 9.5和P物质阳性神经纤维再生,创面深层部分神经纤维末梢向表皮延伸。ESC组、对照组仅见创面深层有少量PGP 9.5和P物质阳性神经纤维,且未向表皮延伸。伤后14、...
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