细胞因子信号转导抑制因子3激酶抑制区对STAT3磷酸化的抑制作用

作者：王丽; 马辉; 焦倩; 王媛媛; 张智超; 杨蓬勃; 陈新林; 李昭荣; 吕海侠; 刘勇

来源：解剖学杂志, 2014, 37(02): 146-169.

DOI：10.3969/j.issn.1001-1633.2014.02.004

• 细胞因子信号转导抑制因子3
• PC12细胞
• 融合肽TAT-KIR
• 白细胞介素-6
• STAT3磷酸化

目的:探讨细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS3)的激酶抑制区(KIR)对细胞内STAT3蛋白磷酸化的影响。方法:化学合成穿膜肽TAT与KIR的融合肽(TAT-KIR),以异硫氰酸荧光素(FITC)进行氨基端标记;不同浓度融合肽加入培养的PC12细胞,荧光显微镜及流式细胞仪检测TAT-KIR的穿膜效果;以白细胞介素-6(IL-6)处理PC12细胞模拟炎症反应,MTT检测细胞活力/增殖情况,免疫印迹检测细胞内磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白水平;对比阴性对照组(正常培养的细胞)、IL-6刺激组、TAT-KIR处理组及TAT-KIR+IL-6处理组细胞的P-STAT3水平,分析SOCS3的KIR对STAT3磷酸化的影响。结果:加入不同浓度TAT-KIR后10 min,显微镜下可见细胞内有绿色荧光出现,并随浓度升高胞内绿色荧光强度增强,其中3μmol/L融合肽30 min时其跨膜转运效率最高,可达99.94%;100 ng/ml IL-6可显著增加PC12细胞活力,并促进胞内STAT3磷酸化水平显著增高;与此相比,TAT-KIR+IL-6组细胞内P-STAT3水平显著下降,但是TATKIR处理组P-STAT3水平与阴性对照组比较差异无统计学意义。结论:KIR可被TAT成功转入细胞内部,并有效抑制IL-6刺激引起的PC12细胞STAT3磷酸化水平的增高,对正常情况细胞STAT3磷酸化的影响不大。

• 单位
  神经生物学研究所; 西安交通大学; 西安交通大学医学院第二附属医院