基于CRISPR/Cas9构建基因编辑小鼠sgRNA有效性验证研究

作者：许文豪; 周婉; 臧敦安; 巩雪洁; 刘庆华; 于孟飞; 薛璐; 彭勇波^*

来源：湖北农业科学, 2018, 57(24): 156-159.

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.24.042

• CRISPR/Cas9
• 小鼠
• sgRNA有效性
• 囊胚

以小鼠S100A9基因为例,设计针对该基因的sgRNA,体外转录后与Cas9 mRNA通过显微注射入受精卵,选取囊胚期的胚胎,单枚独立进行基因型分析,并综合得出编辑效率。结果表明,显微注射113枚受精卵,其中28枚成功发育到囊胚期,其中有5枚囊胚在特定位点产生了基因突变,总编辑效率为18%。该方法操作简单,可快速对sgRNA活性进行体内验证,并为后续基因编辑小鼠的制备提供基础。

• 单位
  生命科学学院; 中南民族大学