人G1P[8]型轮状病毒HN15D2毒株的分离纯化及鉴定

作者：寇桂英; 王云瑾; 程亚慧; 关文竹; 火文; 王名强; 包红; 陈汉泉; 周旭^*; 李雄雄^*

来源：国际生物制品学杂志, 2023, 46(02).

• 轮状病毒
• 分离
• 纯化
• 鉴定

目的对轮状病毒(rotavirus, RV)阳性临床粪便标本进行毒株分离、纯化及鉴定。方法将感染RV的腹泻患儿粪便标本在单层恒河猴肾细胞MA104上传代培养, 分离毒株, 通过噬斑法克隆纯化病毒, 电子显微镜(电镜)观察病毒形态和大小;采用SDS-PAGE、免疫印迹法和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IFA)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)、反转录PCR及全基因组测序对病毒进行鉴定。结果对大量临床标本进行传代筛选和噬斑纯化, 得到1株RV野毒株。50%蔗糖超速离心纯化病毒在电镜下可见直径约75 nm的典型RV颗粒;SDS-PAGE和免疫印迹法结果显示在预期位置出现目的条带;IFA结果显示所分离病毒为RV; RNA-PAGE显示分离株电泳型为长型, 电泳图谱中11个条带呈现4∶2∶3∶2排列;PCR扩增片段及全基因组测序结果表明分离毒株为G1P[8]型。结论成功分离出1株人G1P[8]型RV野毒株, 并命名为HN15D2。

• 单位
  上海生物制品研究所有限责任公司; 兰州生物制品研究所有限责任公司