高通量表达系统在EV71单链抗体表达中的应用

作者：余秋凡; 陶焱炀; 李靖欣; 王圆媛; 张黎^*; 朱凤才

来源：中华实验和临床病毒学杂志, 2019, 33(06): 641-645.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1003-9279.2019.06.017

• ScFv抗体
• 抗体表达盒
• 重叠PCR
• 高通量表达

目的 建立从PCR产物直接表达ScFv抗体的方法,将该方法用于噬菌体抗体库淘选后ScFv抗体的高通量表达。方法 PCR扩增CMV启动子、ScFv和BGH Poly A尾基因片段,使用重叠PCR(overlapping PCR)将上述3个片段依次连接成1个线性的抗体表达盒。瞬时转染293T细胞,并用Western blot、酶联免疫吸附试验(enzyme－linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光抗体试验(indirect immunofluorescent antibody,IFA)检测抗体表达盒中ScFv的表达和抗体的活性。从噬菌体库淘选出的阳性克隆中挑取96个抗体,用该表达盒进行高通量表达,并对表达效果进行评价。结果 成功扩增出3个基因片段,并将3个片段连接成1个线性的表达盒。线性表达盒可直接在293T细胞中瞬时表达,表达上清经Western blot检测可见约相对分子质量为38×103的条带；ELISA和IFA结果均显示表达出来的ScFv抗体能与其对应的抗原特异性结合。同时该系统可以用于噬菌体抗体库中抗体基因的高通量表达。结论 成功构建了ScFv的线型表达盒,并实现了抗体的快速高通量表达。

• 单位
  东南大学; 公共卫生学院; 江苏省疾病预防控制中心