微小RNA-218对大鼠膝骨关节炎细胞的增殖与凋亡调控作用机制研究

作者：蔡礼权; 黄念来; 张小路; 吴世强; 王良铭; 戴章生; 柯庆峰^*

来源：中国临床药理学杂志, 2020, 36(22): 3704-3708.

DOI：10.13699/j.cnki.1001-6821.2020.22.031

• 膝骨关节炎
• 细胞增殖
• 细胞凋亡
• 软骨
• Wnt/β-连环蛋白

目的研究微小RNA-218(miR-218)通过调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路对大鼠膝骨关节炎(KOA)细胞增殖与凋亡的影响。方法按照体重将SD大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、第1转染组和第2转染组,每组15只。模型组、第1转染组和第2转染组大鼠通过向双侧膝关节腔内注射碘乙酸进行KOA造模。成功造模1周后,空白对照组与模型组大鼠注射等量0.9%NaCl,第1转染组大鼠注射慢病毒灭活miR-218质粒3μL(滴度5.0×1012 copies·mL-1);第2转染组大鼠注射慢病毒灭活miR-218质粒3μL(滴度5.0×1012 copies·mL-1)+Wnt/β-catenin信号通路激动剂SKL2001(40μmol·L-1)。用逆转录-PCR法检测软骨组织miR-218基因的表达(OD比值×100),CCK-8检测细胞增殖水平,AnnexinV-FITC/PI染色分析细胞凋亡状态,蛋白质印迹法检测细胞中Bcl-2基因相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)、Wnt和β-catenin的表达。结果空白对照组、模型组、第1转染组和第2转染组的miR-218基因表达分别为115.40±3.02,101.02±2.16,195.10±4.24和231.38±4.72;这4组转染12 h后的细胞增殖水平分别为0.40±0.02,0.44±0.01,0.38±0.01和0.42±0.01;这4组的细胞凋亡率分别为(5.45±1.74)%,(1.87±0.45)%,(13.38±2.43)%,(10.64±1.56)%;这4组的Bcl-2蛋白表达量分别为0.48±0.12,0.87±0.15,0.36±0.11和0.44±0.10;这4组的Bax蛋白的表达量分别为0.24±0.06,0.17±0.05,0.65±0.08和0.43±0.07;这4组的Wnt蛋白表达量分别为0.27±0.07,0.90±0.12,0.46±0.08和0.52±0.10;这4组的β-catenin蛋白表达量分别为0.33±0.08,0.91±0.12,0.45±0.08和0.62±0.09。上述指标:模型组与空白对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);第1转染组、第2转染组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);第2转染组与第1转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。基因结果的趋势与蛋白一致。结论 miR-218基因在细胞内过表达通过下调Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白活性,从而抑制膝骨关节炎软骨细胞增殖趋势并促进软骨细胞凋亡。

• 单位
  福建医科大学附属第二医院