肉鸡谷胱甘肽S-转移酶A3基因的克隆及蛋白的表达和纯化

作者：卢晓晓; 杨世雄; 李娜娜; 张宁; 李欣; 宁官保; 张鼎; 赵宇军; 闫芳; 高荣琨; 田文霞^*

来源：山西农业大学学报(自然科学版), 2019, 39(01): 95-101.

DOI：10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201809044

• 胫骨软骨发育不良
• 谷胱甘肽S-转移酶A3
• 基因克隆
• 原核表达

[目的]谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)是GSTs超家族中α家族的一员,具有解毒功能,同时还参与抗氧化应激引起的信号通路调节,另外在类固醇和前列腺素的合成中也必不可少。[方法]本试验采用RT-PCR方法扩增肉鸡GSTA3基因,连接pZeroBack/blunk克隆质粒,再与表达载体pET-28a连接,并转入E.coli BL21(DE3)中获得pET-28a-GSTA3重组表达质粒,使用IPTG诱导其蛋白的表达,应用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并对其进行SDS-PAGE鉴定,使用谷胱甘肽-S转移酶活性测定试剂盒对重组蛋白进行活性检测。[结果]试验成功构建重组表达质粒pET-28a-GSTA3,并在大肠杆菌中成功表达,其大小为29.6 kDa,与预期一致,并且表达的重组GSTA3蛋白具有生物活性。[结论]本试验成功获得高纯度的可溶性GSTA3融合蛋白,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。

• 单位
  动物科技学院; 山西农业大学