H5N1亚型禽流感病毒核蛋白NP的原核表达及抗体制备

作者：罗孟成; 陶攀; 肖庚富; 潘兹书

来源：中国人兽共患病学报, 2008, (03): 202-204+209.

• H5N1A型流感病毒
• 核蛋白NP
• 原核表达
• 多克隆抗体 H5N1 influenza A virus
• nucleoprotein
• prokaryotic expression
• polyclonal antibody

目的制备H5N1亚型禽流感病毒NP重组蛋白和抗体,为研制含NP组分的人禽流感亚单位疫苗和建立评价方法提供检测抗原和抗体。方法以H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Hubei/489/2004(H5N1)NP基因cDNA克隆质粒pMD-NP为模板,PCR扩增获得NP基因抗原区片段,克隆到原核表达载体pET-28a,构建重组质粒pET-ΔNP,转化大肠杆菌BL21-CondonPlus(DE3)-RIL,IPTG诱导重组蛋白表达。采用Ni亲和层析方法纯化NP重组蛋白,免疫家兔,收集免疫血清,ELISA测定抗体效价;间接免疫荧光检测所制备抗体与真核细胞表达NP蛋白的反应性。结果与结论成功的制备...