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摘要
目的构建针对人瞬态电压感受器阳离子通道,子类V,成员1(TRPV1)基因的p SUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒表达载体,感染U87-MG细胞,观测其沉默TRPV1基因的效果。方法利用Ambion在线设计软件设计针对人TRPV1基因的sh RNA干扰序列,克隆到p SUPERretro-puro载体上。对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析。用磷酸钙法制备p SUPERretro-puro TRPV1逆转录病毒,将其感染到U87-MG细胞,经嘌呤酶素筛选阳性克隆后采用荧光定量PCR及Western blotting法检测TRPV1表达。结果经DNA测序和酶切鉴定表明,p SUPERretro-puro TRPV1表达载体构建成功。p SUPERretropuro TRPV1逆转录病毒感染U87-MG细胞后,细胞中TRPV1表达量明显降低。结论成功构建了针对人TRPV1基因的p SUPERretro-puro TRPV1表达载体。p SUPERretro-puro TRPV1能有效下调TRPV1基因在U87-MG细胞中的表达,为将来应用其研究TRPV1在利多卡因致细胞损伤中的作用奠定了基础。
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