鼻咽癌斑马鱼移植瘤模型的构建及姜黄素对CNE-2细胞的抑制作用

作者：王泽泰; 娄丹丹; 彭燕; 朱道琦; 李爱武; 宫凤英; 吕英; 范钦

来源：吉林大学学报(医学版), 2022, 48(1): 9-17.

DOI：10.13481/j.1671?587X.20220102

• 姜黄素
• 鼻咽肿瘤
• 移植瘤
• 斑马鱼
• 细胞增殖率
• 细胞迁移率

目的:建立人鼻咽癌斑马鱼异种移植瘤模型,探讨姜黄素在体内外对鼻咽癌的抑制作用,为阐明姜黄素抗鼻咽癌的分子机制提供依据.方法:将鼻咽癌CNE-2细胞分为对照组和细胞膜红色荧光染色剂CM-Dil(CM-Dil)组,连续5 d进行细胞计数,并观察荧光强度变化.采用显微注射法构建鼻咽癌斑马鱼异种移植瘤模型,将斑马鱼胚胎分为对照组、PBS组和模型组,对照组斑马鱼胚胎不予处理,PBS组斑马鱼胚胎注射10 nL PBS缓冲液,模型组斑马鱼胚胎注射10 nL CNE-2细胞悬液,孵育培养后统计各组斑马鱼存活数,采用宏观体式显微镜观察并定量分析模型组斑马鱼体内移植瘤荧光强度,HE染色观察对照组和模型组斑马鱼移植瘤组织形态表现.将受精后天数(dpf)为3的斑马鱼胚胎暴露于含不同浓度(0、0.625、1.250、2.500、5.000、7.500和10.000μmol·L-1)姜黄素的饲养水中,观察斑马鱼死亡数和畸形数并计算斑马鱼死亡率,筛选姜黄素体内用药浓度.采用0、0.625、1.250、2.500和5.000μmol·L-1姜黄素作用于斑马鱼鼻咽癌模型48 h,检测移植瘤生长和转移情况.0、10和20μmol·L-1姜黄素作用CNE-2细胞24 h,CCK-8法和划痕实验检测细胞增殖率和迁移率.结果:与对照组比较,CM-Dil组CNE-2细胞数差异无统计学意义(P>0.05).实验第5天,与对照组比较,PBS组斑马鱼存活数差异无统计学意义(P>0.05);与对照组和PBS组比较,模型组斑马鱼存活数明显减少(P<0.01).模型组斑马鱼体内红色荧光随着时间的延长而增强;与注射后第1天比较,注射后第5天模型组斑马鱼体内红色荧光强度明显增强(P<0.05).HE染色,模型组斑马鱼切片中的卵黄囊有CNE-2细胞,提示造模成功.浓度小于或等于5.000μmol·L-1姜黄素组斑马鱼无死亡及明显毒性反应.与对照组(0μmol·L-1姜黄素组)比较,2.500和5.000μmol·L-1姜黄素组斑马鱼体内移植瘤荧光强度明显降低(P<0.05或P<0.01),5.000μmol·L-1姜黄素组发生头尾部转移的斑马鱼数量明显减少(P<0.05).CCK-8法检测和划痕实验,与对照组(0μmol·L-1姜黄素组)比较,10和20μmol·L-1姜黄素组CNE-2细胞增殖率和迁移率明显降低(P<0.05).结论:人鼻咽癌CNE-2细胞可以成功植入斑马鱼体内并构建鼻咽癌斑马鱼模型,姜黄素在体内外均能抑制鼻咽癌细胞的增殖和转移,具有良好的抗肿瘤前景.