三重靶向介导的Smac过表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期进程的影响

作者：齐亚莉; 刘扬; 梁硕; 龚守良; 王志成; 刘威武

来源：吉林大学学报(医学版), 2018, 44(01): 90-94.

DOI：10.13481/j.1671-587x.20180117

• 乏氧
• 辐射
• 第2个线粒体衍生的胱天蛋白酶激活剂
• 乳腺肿瘤
• 细胞凋亡

目的:利用基因重组技术获得三重靶向性Smac过表达的条件复制型腺病毒,探讨其对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和周期的影响。方法:利用重组技术构建Smac过表达载体pShuttle-Egr1-Smac-HREhTERT-E1A-E1Bp-E1B55K,与骨架载体pAdEasy在BJ5183(AdEasy-1+)菌中进行重组,获得Smac过表达的条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac,感染MDA-MB-231细胞后,利用化学试剂氯化钴模拟肿瘤细胞乏氧状态,设立对照组、CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组,并根据是否进行4Gy照射,每组分为未照射组和照射组,共8个实验组。利用Western blotting法检测各组细胞Smac蛋白的表达,利用流式细胞术检测细胞凋亡率和不同周期进程细胞百分率。结果:Western blotting法检测,经条件复制型腺病毒CRAd.pESmac感染、乏氧和照射后,Smac蛋白表达水平增加,CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组Smac蛋白表达水平最高。流式细胞术检测,与对照组比较,CARd.pE-Smac组、乏氧组和CARd.pE-Smac+乏氧组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01);与相应未照射组比较,4Gy照射后CARd.pE-Smac+4Gy组、乏氧+4Gy组和CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组细胞凋亡率均明显升高(P<0.05或P<0.01),CARd.pE-Smac+乏氧+4Gy组升高最为明显,且S期和G2/M期细胞百分率明显增加(P<0.05或P<0.01),与诱导凋亡的结果有相似的趋势。结论:在条件复制型腺病毒CRAd.pE-Smac感染MDA-MB-231细胞、并经乏氧和辐射处理后,实现了三重靶向介导的Smac过表达,其具有促进肿瘤细胞凋亡和诱导G2/M期细胞阻滞的作用。

• 单位
  吉林大学; 公共卫生学院; 吉林大学第二医院; 北华大学