分泌人干扰素α-2a 的重组卡介苗的构建、表达与鉴定

作者：刘海涛; 孙晓文; 张沂南; 卓见; 凡杰; 王丰; 夏术阶

来源：中华医学杂志, 2006, 86(34): 2417-2420.

DOI：10.3760/j:issn:0376-2491.2006.34.011

• 卡介苗
• 膀胱肿瘤
• 干扰素α-2a
• RNA,信号肽

目的构建分泌人干扰素α-2a(IFNα-2a)的重组卡介苗(rBCG)。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术从卡介苗基因组中扩增出 Ag85B 的信号肽基因序列,从 pBIFNα-2a 质粒中扩增出IFNα-2acDNA 全长序列。利用 DNA 重组技术将以上两个片段插入质粒 pMV261结核杆菌 HSP60启动子下游,构建一个分泌型的卡介苗穿梭表达质粒 pMSIFNα-2a。利用电穿孔技术将质粒 pMSIFNα-2a 转入卡介苗得到 rBCG,分别用 PCR 扩增和 Western 印迹检测 rBCG 菌体和培养上清中 IFNα-2a 的DNA 和蛋白表达,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测 rBCG 培养上清中 IFNα-2a 的含量。结果酶切鉴定、PCR 扩增和 DNA 测序分析结果均表明,所克隆的信号肽 DNA 片段和 IFNα-2a 片段与文献结果完全一致,pMSIFNα-2a 的连接方向正确,阅读框与预期完全一致。以 rBCG 质粒 DNA 为模板,通过PCR 扩增得到 IFNα-2a 的基因片段,Western 印迹证实 rBCG 分泌的蛋白能与人 IFNα-2a 的抗体特异性结合,ELISA 法检测到 rBCG 培养上清中高含量的 IFNα-2a(324.57 pg/ml)。结论构建的 rBCG 能够分泌具有功能活性的细胞因子 IFNα-2a,有望成为膀胱肿瘤免疫治疗的一种有效方法。

• 单位
  上海交通大学