应用70mer Oligo基因芯片从限制性cDNA片段中钓取目的基因

作者：石嵘; 马文丽; 刘翠华; 宋艳斌; 吴清华; 郭秋野; 郑文岭

来源：第一军医大学学报, 2004, (07): 738-741.

DOI：10.3321/j.issn:1673-4254.2004.07.003

• 基因芯片
• RD-PCR
• 荧光标记
• 芯片剥除

目的 探讨采用单一探针寡核苷酸阵列从经限制性显示方法制备的cDNA片段中钓取目的基因片段的方法。方法酵母经常规培养,抽提mRNA逆转录成cDNA后,经限制性显示技术制备成限制性cDNA片段,根据目的基因SSA1设计70mer特异性oligo片段并打印成为寡核苷酸阵列。采用荧光标记的通用引物对上述经限制性显示技术获得的限制性cDNA片段进行标记,与oligo阵列杂交,洗脱,扫描。然后进行杂交后剥除,收集剥除液,采用限制性通用引物扩增,产物克隆于PUC18T载体中,并转化至JM109大肠杆菌中培养,抽提质粒,进行测序鉴定。结果 测序结果BLAST同源性比较表明,用该方法成功的克隆出了目的基因片段。结论 采用70mer寡核苷酸芯片可以直接从限制性显示方法处理的cDNA片段中钓取目的基因,而无需构建cDNA文库。另外,本方法也可用于oligo芯片的杂交后对有表达差异的基因的获取及研究中。

• 单位
  南方医科大学; 广州军区广州总医院