核定位CBFβ基因重组腺相关病毒载体的构建与鉴定

作者：关天富; 段莉; 王大平

来源：医学研究杂志, 2023, 52(04): 26-30.

DOI：10.11969/j.issn.1673-548X.2023.04.008

• 核定位信号
• 核结合因子
• 腺相关病毒
• 软骨分化
• 间充质干细胞

目的 构建携带核定位信号的核结合因子(nuclear location signal core binding factor beta, NLS-CBFβ)的重组腺相关病毒载体，从而实现体外诱导关节液间充质干细胞成软骨分化。方法 使用分子生物学方法将腺相关病毒载体与NLS-CBFβ基因相结合，构建pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒；采用PEI转染法将pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒和pAAV-RC、pAAV-Helper质粒共转染至AAV-293细胞中，包装并生产携带CBFβ的重组腺相关病毒rAAV-NLS-CBFβ-RFP,进一步将病毒感染人关节液来源间充质干细胞，实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测CBFβ基因在细胞内的表达水平。结果 双酶切及DNA测序证明NLS-CBFβ已成功构建到pAAV-NLS-CBFβ-RFP表达质粒中，AAV-293细胞表达红色荧光蛋白提示共转染成功，包装的重组腺相关病毒rAAV-CBFβ-RFP感染人关节液间充质干细胞后，能显著增加细胞中CBFβ基因的表达水平。结论 携带NLS-CBFβ重组腺相关病毒的包装成功，并能在人关节液间充质干细胞中有效转染和表达，为进一步探索rAAV-NLS-CBFβ诱导间充质干细胞成软骨分化的研究提供了实验基础。

• 单位
  汕头大学医学院; 深圳大学; 深圳市第二人民医院