重组人肠道病毒71型病毒样颗粒疫苗外源DNA残留量检测方法的建立

作者：杨萍; 张艳; 李微; 刘大维; 闫慧; 褚彦飞; 白鹭; 谷铁军; 孙博^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(03): 308-315.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003012

• 地高辛探针杂交
• DNA残留
• 昆虫细胞
• 重组人肠道病毒71型
• 病毒样颗粒

目的建立重组人肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗原液中昆虫细胞宿主DNA残留的地高辛探针杂交检测方法。方法抽提昆虫细胞sf9基因组DNA,经分子筛纯化后作为阳性对照品;分别以1 000～5 000 bp和100～1 000 bp的基因组DNA超声随机小片段为模板,制备地高辛探针,与阳性对照进行杂交试验。同时验证方法的检测范围、灵敏度和特异性,并采用该方法对3批重组EV71 VLPs疫苗原液中宿主DNA残留量进行测定。结果纯化后DNA样品浓度为47. 5 ng/μL,A260/A280值为1. 86,可作为阳性对照。以100～1 000 bp DNA超声随机小片段作为模板,探针标记效率更高,杂交显色更清晰。该法检测范围为10 pg～10 ng,灵敏度达1 pg,特异性强。3批重组EV71 VLPs疫苗原液中每人份剂量的宿主细胞DNA残留均<50 pg。结论本实验建立的方法特异性强,灵敏度高,可用于重组EV71 VLPs疫苗制备过程中的原液检定及质量控制。

• 单位
  吉林大学; 生命科学学院