科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的 探讨壮腰通络方延缓腰椎间盘退变的可能机制。方法 利用佛波酯、干扰素γ和脂多糖将THP-1细胞诱导为M1巨噬细胞，与髓核细胞建立Transwell共培养体系。首先以胎牛血清作为对照血清，采用MTT法分析不同体积分数（5%、10%、15%、20%）壮腰通络方大鼠含药血清对M1和髓核细胞活性的影响，筛选后续实验药物浓度。随后建立实验一，分为髓核细胞对照组、M1巨噬细胞对照组、髓核细胞+壮腰方组、髓核细胞+肿瘤坏死因子α (TNF-α)组、髓核细胞+TNF-α+壮腰方组、共培组、共培+壮腰方组，每组3个复孔。利用ELISA法检测各组培养上清白细胞介素1β (IL-1β)和白细胞介素18 (IL-18)含量，实时荧光定量PCR检测髓核细胞中IL-1β和IL-18 mRNA表达，细胞免疫荧光法检测髓核细胞中Gasdermin D(GSDMD)蛋白表达。实验二利用TNF-α过表达质粒或TNF-α空载体质粒干预M1巨噬细胞，并在共培养条件下分为共培组、空载体质粒+共培组、空载体质粒共培+壮腰方组、共培+壮腰方组、过表达质粒共培+壮腰方组、过表达质粒+共培组，每组3个复孔。利用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法检测各组M1巨噬细胞中TNF-α mRNA和蛋白表达。结果 最终筛选出10%的壮腰通络方含药血清进行后续实验。实验一结果显示，与髓核细胞对照组比较，髓核细胞+壮腰方组IL-1β、IL-18含量及mRNA、GSDMD表达差异无统计学意义（P>0.05），而髓核细胞+TNF-α组和共培组IL-1β、IL-18含量及mRNA、GSDMD表达均显著增加（P<0.01）。与共培组比较，共培+壮腰方组IL-1β、IL-18含量及mRNA、GSDMD表达均显著降低（P<0.01）。实验二结果显示，与共培组比较，空载体质粒+共培组TNF-α mRNA和蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。与空载体质粒+共培组比较，空载体质粒共培+壮腰方组TNF-α mRNA和蛋白表达均显著降低（P<0.01）。与共培组和空载体质粒+共培组比较，共培+壮腰方组TNF-α mRNA和蛋白表达显著降低（P<0.01）；与共培+壮腰方组比较，过表达质粒共培+壮腰方组TNF-α mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.01）；与过表达质粒共培+壮腰方组比较，过表达质粒+共培组TNF-α mRNA和蛋白表达均显著增加（P<0.01）。结论 壮腰通络方含药血清能够通过降低M1巨噬细胞中TNF-α的表达，抑制由TNF-α诱导的髓核细胞焦亡恶性循环，延缓腰椎间盘退变。
-
单位中国中医科学院望京医院; 山东中医药大学
