γ-突触核蛋白的克隆、表达及纯化

作者：刘晓娟; 张力青; 李健; 翟方丽; 李慎涛

来源：首都医科大学学报, 2011, (02): 254-258.

• γ-突触核蛋白
• 融合蛋白
• 原核表达
• 蛋白纯化 synuclein gamma
• fusion protein
• prokaryotic expression
• purification

目的对γ-突触核蛋白(synuclein)基因进行克隆,并对其表达及纯化条件进行优化。方法根据GenBank中γ-突触核蛋白的基因序列,设计PCR引物,从人脑cDNA文库中扩增γ-突触核蛋白的编码DNA序列,将其克隆至pGEX-6p-1载体中,构建重组质粒,将测序正确的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达;对培养温度、IPTG的用量、诱导时间等条件进行了优化;用SDS-PAGE和质谱分析表达的目标蛋白;用亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤纯化目标蛋白。结果γ-突触核蛋白在大肠杆菌中高效、可溶性表达,经质谱鉴定及SDS-PAGE分析,表达产物为γ-突触核蛋白。经过纯化,得...

• 单位
  首都医科大学; 清华大学第一附属医院