CCHFV S基因的重组杆状病毒的构建及鉴定

作者：思越; 宋曦玉; 杨继磊; 雷迎峰; 张芳琳; 程林峰^*

来源：传染病信息, 2020, 33(05): 407-415.

• 克里米亚-刚果出血热病毒
• 杆状病毒表达系统
• 核衣壳蛋白

目的利用杆状病毒表达系统(baculovirus expression vector systems, BEVS)构建含有克里米亚-刚果出血热病毒(Crimean-Congo hemorrhagic fever virus, CCHFV)S基因的重组杆状病毒,并在sf9昆虫细胞中表达出核衣壳蛋白(nucleoprotein, NP)。方法将合成的CCHFV S基因定向克隆入杆状病毒转移载体pFastBac?Dual,获得重组的转移载体pFastBac?Dual-CCHFV-S。将其转化到E. coli DH10Bac?感受态细胞中,筛选得到重组杆状病毒杆粒rBV-Bacmid-S。用Cellfectin?II试剂将rBV-Bacmid-S转染入sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒rBV-CCHFV-S。通过IFA和Westernblot检测CCHFV S基因的表达。结果构建了含有S基因的rBV-CCHFV-S,在sf9昆虫细胞中成功表达CCHFV NP。结论利用BEVS可以成功表达CCHFV NP,这为研究CCHFV NP的生物学特性,研制特异性的治疗药物和预防控制疫苗奠定基础。

• 单位
  中国人民解放军空军军医大学; 基础医学院