科研之友
微信
新浪微博
Facebook
分享链接
摘要
目的探讨HLA-Gα1结构域中特异的Met76和Gln79两个位点在HLA-G特异性受体KIR2DL4识别中的作用。方法采用真核表达载体CD51neg1,克隆表达KIR2DL4胞外区与IgG Fc段的可溶性融合蛋白；利用“桥式”PCR和“点突变”方法,将位于HLA-G目的基因α1结构域中编码Met76和Gln79的密码子突变为Ala76,79（HLA-mG）,通过逆转录病毒表达载体分别使野生型HLA-G及其突变体在HLAI分子阴性的K562细胞上表达。流式细胞术分别测定KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白与野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79HLA-G突变体结合的荧光强度,通过比较两者的平均荧光强度分析HLA-G分子Mel76、Gln79残基在HLA-G与其受体KIR2DL4识别过程中的作用。结果Western blot结果显示,本实验成功表达KIR2DL4-IgG Fc融合蛋白。FACS结果表明,野生型HLA-G及Met76、Gln79→Ala76,79HLA-G突变体在K562细胞上高表达。Met76、Gln79突变为Ala76,79后能显著影响KIR2DL4对HLA-G分子的识别。结论HLA-Gα1结构域中Met76和Gln79可能是其特异性受体KIR2DL4识别的关键位点。
-
单位温州医科大学; 浙江省台州医院
