屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性鉴定

作者：黄娜娜; 陈德盛; 常可欣; 关律昕; 杨礼腾; 刘志刚; 刘晓宇^*

来源：南昌大学学报(医学版), 2018, 58(06): 5-10.

DOI：10.13764/j.cnki.ncdm.2018.06.002

• 屋尘螨
• Der p7基因
• 表达
• 纯化
• 过敏原性

目的探讨屋尘螨Der p7基因的克隆表达、纯化及过敏原性分析。方法逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)扩增屋尘螨Der p7基因,经酶切、连接后转化大肠杆菌,挑取阳性单克隆菌落,扩增培养后测序鉴定正确后大量表达;采用亲和层析法纯化表达产物,免疫印迹(Western blot)法鉴定其过敏原性;生物信息学方法分析其基因的同源性。结果 RT-PCR显示Der p7基因片段大小约700 bp;大量表达后进行的SDS-PAGE电泳分析显示,Der p7蛋白表达于沉淀物中,以包涵体蛋白为主,分子质量约39 kDa。Western blot显示该重组基因所表达的蛋白可与尘螨过敏患者的血清起反应,表明该重组蛋白具有过敏原性。生物信息学分析显示克隆的Der p7基因与Der f7基因的同源性约79.14%。结论本实验成功获得大量表达及纯化后具有过敏原性的Der p7蛋白,对临床上完善对过敏性疾病的检测与治疗具有积极的意义。

• 单位
  深圳大学