细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白单抗的制备及夹心ELISA检测方法的建立

作者：朵红; 付永; 沈秀英; 郭志宏; 张学勇; 马怡隽

来源：动物医学进展, 2021, 42(10): 31-36.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2021.10.006

• 细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白
• 单克隆抗体
• 夹心ELISA

为建立一种早期诊断动物细粒棘球蚴病的方法,诱导表达含PET-EgAgB8/2载体的原核表达菌,以表达纯化蛋白为抗原,制备单克隆抗体,并以制备的抗体建立检测细粒棘球蚴病夹心ELISA方法。结果显示,原核表达菌在37℃诱导培养,菌体上清中大量表达,经验证为目的蛋白,用纯化蛋白免疫小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合,筛选得到9株具有良好特异性、稳定分泌单克隆抗体的细胞株,经两两配对,选择75C86/15作为包被抗体,27E57/32为酶标二抗,当包被抗体浓度为1.42μg/mL, 4℃包被过夜、用含50 g/L脱脂奶粉的PBST封闭、抗原作1∶100稀释、酶标二抗1∶1 000稀释、反应底物作用15 min时效果最佳,检测方法的特异性为98.8%,敏感性为95.3%。成功制备细粒棘球蚴抗原B8/2蛋白单克隆抗体并建立了ELISA检测方法。

• 单位
  青海大学