鹿流行性出血热病毒核心样颗粒的制备与鉴定

作者：黄超华; 花群俊; 吴江; 曹琛福; 林彦星; 史卫军; 林永涛; 曾少灵; 杨俊兴; 花群义^*

来源：中国兽医科学, 2021, 51(08): 1023-1028.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0141

• 鹿流行性出血热病毒
• VP3蛋白
• VP7蛋白
• 核心样颗粒

为制备鹿流行性出血热病毒(EHDV)的核心样颗粒(CLPs),本研究将鹿流行性出血热病毒(EHDV)L3与S7基因片段插入至昆虫杆状病毒穿梭载体pFastBac-Dual中,构建重组质粒pFastBac-Dualvp3-vp7,并通过转座获得重组杆状病毒质粒Bacmid-vp3-vp7,随后转染Sf9细胞获得重组杆状病毒rBac-vp3-vp7。通过重组杆状病毒感染Sf9细胞共表达VP3和VP7蛋白,并利用蔗糖梯度离心进行纯化,两者组装形成CLPs。负染后通过透射电镜观察纯化产物的形态,Western-blotting验证其反应原性,免疫小鼠检验其免疫原性。结果显示,透射电镜下可以观察到纯化产物中含有大量的与EHDV形态相似的直径为60～70 nm的中空颗粒;以绵羊EHDV阳性血清为一抗的Western-blotting可以检测到大小分别为100 ku和38 ku的2条蛋白条带,分别与EHDV VP3和VP7蛋白大小一致;间接ELISA结果显示,3次免疫后可刺激产生的EHDV特异性抗体效价可达1∶12 800。上述结果表明,本研究获得了具有典型形态、良好反应原性和免疫原性的EHDV核心样颗粒(CLPs)。

• 单位
  深圳海关动植物检验检疫技术中心