三联组氨酸核苷酸结合蛋白2启动子报告基因质粒的构建和活性鉴定

作者：许呈扬; 蔡少鑫

来源：海峡药学, 2016, 28(11): 252-254.

• Hint2
• 启动子
• 荧光素酶

目的三联组氨酸核苷酸结合蛋白2(Hint2,histidine triad nucleotide binding protein 2)在肝癌组织中低表达并与临床病理分期和病人预后密切相关,为研究Hint2的基因表达调控,构建人Hint2启动子荧光素酶报告基因质粒并鉴定活性。方法提取人基因组DNA,以其为模板,将含有Hint2启动子的不同长度的片段插入荧光素酶质粒p GL3-basic,后与β-半乳糖苷酶共转染He La细胞,转染后24h通过β-半乳糖苷酶实验检测转染效率,通过荧光素酶实验检测转录活性。结果质粒p GL3-h1(-6--463,457bp),p GL3-h2(-6--1255,1249bp)构建成功后,与β-半乳糖苷酶共转染人子宫颈癌He La细胞。转录活性=荧光素酶值/β-半乳糖苷酶值,结果显示p GL3-basic荧光素酶值/β-半乳糖苷酶值为147.3272,而p GL3-h1为67936,p GL3-h2为64234.19。空质粒与p GL3-h1,p GL3-h2之间差异具有统计学意义,而p GL3-h1,p GL3-h2之间差异不具有统计学意义。结论 Hint2位于转录起始位点上游-6至--463之间的启动子区域具有强转录活性。

• 单位
  福建省立医院