化滞柔肝颗粒通过诱导自噬缓解非酒精性脂肪肝细胞模型脂肪变性

作者：施亚敏; 付智慧; 朱春胜; 李晓萍

来源：中国中药杂志, 2022, 1-11.

DOI：10.19540/j.cnki.cjcmm.20221111.401

• 化滞柔肝颗粒
• 非酒精性脂肪肝
• 自噬
• 脂肪变性
• SIRT1/AMPK信号通路

探讨化滞柔肝颗粒对混合脂肪酸诱导的非酒精性脂肪肝L02细胞模型自噬的影响及其缓解脂肪变性的可能机制。棕榈酸（palmitic acid，PA）和油酸（oleic acid，OA）以1:2比例混合制备成游离脂肪酸（free fatty acid，FFA）混合液，诱导L02细胞24 h发生脂肪变性，建立非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD）体外模型。CCK-8法测定各组的细胞增殖活力；油红O染色法观察肝细胞脂肪变性的程度；酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbnent assay，ELISA）测定肝细胞中甘油三酯（triglyceride，TG）含量；透射电镜（transmission electron microscopy，TEM）观察细胞内自噬体的形成；LysoBrite Red荧光探针检测溶酶体内pH变化；mRFP-GFP-LC3腺病毒转染检测对细胞内自噬流的影响；免疫印迹法（Western blot）检测自噬标记物LC3B-I/II、自噬底物p62、沉默信息调节因子1（silent information regulator 1，SIRT1）/腺苷酸激活蛋白激酶[adenosine 5’-monophosphate （AMP）-activated protein kinase，AMPK]信号通路蛋白表达水平。FFA在0.2 mmol·L-1 PA和0.4 mmol·L-1 OA条件下成功诱导NAFLD细胞模型；与模型组相比，化滞柔肝颗粒不同剂量均显著降低细胞内TG含量（P＜0.05，P＜0.01）；油红O染色显示各给药组脂滴分布较模型组减少；透射电镜观察到细胞内自噬体形成增多；mRFP-GFP-LC3腺病毒转染结果显示化滞柔肝颗粒促进自噬溶酶体形成，从而促进自噬流的形成；LysoBrite Red染色结果显示化滞柔肝颗粒通过调控溶酶体内pH影响溶酶体功能；Western blot结果显示化滞柔肝颗粒显著升高LC3B-II、SIRT1、p-AMPK和磷酸化蛋白激酶A（phospho-protein kinase A，p-PKA）蛋白的表达水平（P＜0.01），显著降低p62蛋白的表达水平（P＜0.01）。化滞柔肝颗粒可以有效地防治混合脂肪酸诱导的NAFLD细胞模型脂肪变性，其作用机制可能与促进细胞自噬和调控SIRT1/AMPK信号通路有关。

• 单位
  郑州大学第一附属医院