FADS1基因对猪不饱和脂肪酸含量的影响研究

作者：张天天; 华再东; 任红艳; 顾浩; 周彬^*; 毕延震^*

来源：中国畜牧兽医, 2023, 50(02): 451-459.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2023.02.003

• FASD1基因
• 过表达
• 脂肪酸
• ω-3
• ω-6

【目的】研究脂肪酸去饱和酶1(fatty acid desaturases 1,FADS1)基因对不饱和脂肪酸代谢的调控作用，为揭示其分子机制提供参考。【方法】利用PCR扩增猪FADS1基因的CDS区，将目的基因与pcDNA3.1(-)骨架载体连接获得重组表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,将重组表达载体瞬时转染宁乡猪肾成纤维细胞，转染后24、48 h分别收集细胞，利用实时荧光定量PCR和Western blotting检测FADS1基因的表达情况，经过遗传霉素(geneticin, G418)筛选之后获得稳定表达FADS1基因的细胞系，命名为1-4#。利用甘油三酯检测试剂盒检测野生型和1-4#细胞甘油三酯含量变化；利用气相色谱质谱法(gas chromatography-mass spectrometer, GC-MS)检测野生型和1-4#细胞不饱和脂肪酸含量变化情况。【结果】成功获得过表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,在转录水平和蛋白水平检测均有过表达效果。通过G418筛选出1株稳定过表达FADS1基因的单克隆细胞。甘油三酯含量测定结果显示，与野生型宁乡猪肾成纤维细胞相比，过表达FADS1的宁乡猪肾成纤维细胞中甘油三酯的含量显著降低(P<0.05)。不饱和脂肪酸检测结果显示，过表达FADS1后，总脂肪酸的含量极显著升高(P<0.01),提高1.8倍，多不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid, PUFA)中ω-3 PUFA、ω-6 PUFA含量均极显著升高(P<0.01),二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid, EPA)、二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid, DPA)、二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid, DHA)的相对含量极显著提高(P<0.01),ω-3/ω-6值显著提高(P<0.05)。【结论】成功构建超表达载体pcDNA3.1-FLAG-FADS1,并在宁乡猪肾成纤维细胞中成功筛选到了1株稳定超表达FADS1基因的单克隆细胞1-4#,经检测，FADS1基因超表达能显著降低细胞中甘油三酯含量、提高ω-3 PUFA含量及占比，提高ω-3/ω-6值。

• 单位
  湖北省农业科学院畜牧兽医研究所; 湖北工业大学