T26P和A30P位点突变对Thermobifida fusca葡萄糖异构酶热稳定性及活性的影响

作者：邓辉; 陈晟; 陈坚; 吴敬

来源：中国生物工程杂志, 2013, 33(10): 67-72.

DOI：10.13523/j.cb.20131010

• 定点突变
• 热稳定性
• 嗜热菌
• 葡萄糖异构酶

通过定点突变技术构建了嗜热菌Thermobifida fusca葡萄糖异构酶(TFGI)的3个突变体:TFGI/T26P,TFGI/A30P和TFGI/T26P/A30P。结果表明突变体TFGI/A30P的热稳定性得到提高,70℃下半衰期从14.9h提高到22.3h,且最适温度不变,最适温度下的比酶活保持不变。而突变体TFGI/T26P和TFGI/T26P/A30P在70℃下半衰期都降到8.1h,最适温度和最适温度下的比酶活也都显著降低。TFGI及其单突变体的三维结构模型叠加分析结果表明:突变体A30P没有产生其它分子间作用力,TFGI的"Phe27环"的基本结构没有改变,因脯氨酸残基降低了蛋白解折叠的熵值,所以其热稳定性提高而比活力不变。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 江南大学; 食品科学与技术国家重点实验室; 生物工程学院