EG14-3-3真核表达蛋白的纯化及空间结构的生物信息学预测

作者：赵商岐; 郑佳; 李艳敏; 张传山; 贾海英; 龚巧巧; 林仁勇; 周晓涛^*

来源：中国病原生物学杂志, 2022, 17(05): 532-536.

DOI：10.13350/j.cjpb.220507

• 细粒棘球蚴
• EG14-3-3
• 真核蛋白表达
• 生物信息学预测

目的 构建真核表达载体pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his,经表达、纯化后获得融合蛋白EG14-3-3-myc-his,并通过生物信息学预测EG14-3-3蛋白的空间结构。方法 以pet41a-EG14-3-3为模板PCR扩增EG14-3-3基因的CDS区，经限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切后连接到真核表达质粒pcDNA3.1-myc-his A(-)中，构建真核表达质粒pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his。将质粒转染入293T细胞中表达EG14-3-3-myc-his蛋白，经亲和层析纯化后进行Western blot鉴定，通过在线网站对EG14-3-3蛋白空间结构进行生物信息学预测。结果 成功构建pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his真核表达质粒，表达产物纯化后经SDS-PAGE电泳分析其分子质量为27.9 ku,与预期一致，且以第3次(4℃过夜)洗涤的靶蛋白含量较高。Western blot检测纯化后带有His标签的重组蛋白EG14-3-3-myc-his能被His单克隆抗体识别。生物信息学预测EG14-3-3蛋白无信号肽和跨膜区，其二级结构中的N端为无规则卷曲，之后紧连两个α螺旋，C末端为无规则卷曲和较短的片层结构。结论 成功构建了pcDNA3.1-EG14-3-3-myc-his真核表达载体，通过蛋白纯化技术获得高纯度的蛋白。表达的EG14-3-3蛋白含有无规则卷曲，可能为抗原表位所在位置，为进一步研究14-3-3蛋白的功能及应用奠定了实验基础。

• 单位
  新疆医科大学第一附属医院; 新疆医科大学; 基础医学院; 新疆维吾尔自治区人民医院