肾癌ACHN细胞HIF-1α基因siRNA真核表达质粒的构建与筛选

作者：马亚东; 王子明; 种铁

来源：现代泌尿外科杂志, 2012, (04): 337-341.

• 肾透明细胞癌
• ACHN细胞
• 缺氧诱导因子-1α
• 质粒
• 小干扰RNA carcinoma of the kidney
• ACHN cell
• hypoxia-inducible factor-1α
• plasmid
• small interfering RNA

目的采用RNA干扰方法,构建及筛选对肾透明细胞癌ACHN细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因有干扰沉默作用的真核表达质粒。方法 CoCl2缺氧诱导培养ACHN细胞高表达HIF-1α,设计并化学合成4条针对HIF-1α基因的小干扰RNA(siRNA)序列,构建相应真核表达质粒pU6H1-GFP-HIF1α-siRNA-1/2/3/4,经测序分析,质粒构建成功后,分别转染ACHN细胞后培养24h,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,计算转染效率,采用荧光实时定量PCR(real time-PCR)和免疫印记杂交法(Western blot)分别检测HIF-1α的mRNA与蛋白表达水平。结果质...

• 单位
  西安交通大学; 延安大学附属医院